老干妈主要使用 贵州特有的朝天椒作为辣椒原料。朝天椒辣度适中，香而不燥，是贵州地区的特色辣椒品种之一。此外，老干妈在制作过程中还会使用到大豆油、菜籽油、花椒、大蒜等多种原料，每一种原料都有严格的质量标准。
尽管有报道称老干妈在其他时期也使用过其他产地的辣椒，如新疆辣椒、河南辣椒和内蒙古辣椒等，以节省成本，但贵州朝天椒仍然是其核心的辣椒原料，赋予了老干妈独特的香辣风味。