反相色谱（Reversed Phase Chromatography, RPC）是一种 基于固定相和流动相极性相反的色谱技术。在反相色谱中，固定相的极性通常小于流动相的极性，这意味着极性较强的组分会在色谱过程中先于极性较弱的组分流出。
原理
反相色谱的原理是利用溶质分子与固定相和流动相之间的相互作用力差异来实现分离。由于固定相的极性较小，它更倾向于吸附非极性或中等极性的溶质分子。当流动相通过色谱柱时，它会带走这些被吸附的溶质分子，从而实现对非极性或中等极性物质的分离。
应用领域
反相色谱在多个领域有广泛应用，特别是在生物大分子的分离和分析中。由于其高效性和灵活性，反相色谱在现代液相色谱分析中占据重要地位，应用比例超过70%。
固定相和流动相
固定相：在反相色谱中，固定相通常为非极性键合相，如C18柱。这些柱子的表面通常涂有非极性材料，能够有效地吸附非极性或中等极性的溶质分子。
流动相：流动相的极性大于固定相，常用的流动相包括甲醇、乙醇和水等极性溶剂。
特点
分离顺序：在反相色谱中，极性较强的组分先流出，极性较弱的组分后流出。
应用广泛：反相色谱适用于非极性物质或中等极性物质的分离分析，如有机溶剂、农药、药物代谢产物等。
注意事项
色谱柱选择：选择合适的色谱柱和流动相对于获得良好的分离效果至关重要。
样品准备：确保样品适合反相色谱分析，避免使用极性过强的化合物干扰分离。
洗脱条件：调整洗脱液的组成和流速，以优化分离效果和色谱峰的形状。
反相色谱作为一种高效的色谱技术，在化学、生物、医药等领域具有广泛的应用价值。通过合理选择固定相和流动相，以及优化操作条件，可以实现对复杂混合物中各组分的高效分离和分析。